Optická imunostanovení v multiplexním formátu

Bc. Matěj Pastucha

Diplomová práce

Multiplexed optical immunoassay

Anotace:

Diplomová práce se zabývá vývojem imunochemických multianalytových čipů, miniaturizovaných bioanalytických platforem nesoucích potenciál na ploše velikosti mikroskopového sklíčka citlivě a specificky detekovat paralelně stovky či tisíce analytů. V teoretické části práce byla zpracována rešerše o současném stavu na poli proteinových čipů. V rámci praktické části bylo provedeno množství pokusů směřujících k nalezení optimální metody přípravy takových miniaturizovaných analytických čipů. K imobilizaci biomolekul byla využívána různě chemicky aktivovaná sklíčka, a to vlastní výroby i komerční. Reagencie byly na povrch nanášeny pomocí ink-jet mikrodepozičního systému. Cílem bylo zprovoznit v tomto formátu bioafinitní stanovení s modelovým systémem lidský sérový albumin – monoklonální protilátka, což se částečně podařilo. Hodnocení vyrobených čipů bylo prováděno fluorescenčně, k čemuž byl využíván fluorescenční mikroskop a fluorescenční skener. Byla vyhodnocena vhodnost používaných postupů pro další práci v této oblasti.

Abstract:

This thesis deals with the development of immunochemical multianalyte microarrays, miniaturized bioanalytical platforms carrying the potential for an area the size of a microscope slide sensitively and specifically detected in parallel by hundreds or thousands of analytes. The theoretical part was compiled research on the current situation in the field of protein microarrays. In the practical part, numerous experiments were carried out trying to find an optimal method of preparing such miniaturized analytical array. Variously chemically activated slides, of our own production and commercial, were used for immobilization of biomolecules. Reagents were dispensed using ink-jet microdeposition. The aim was to get a model system of human serum albumin and a monoclonal antibody to work on this format, and I was partially successful in it. Analysis of produced microarrays was performed by the means of fluorescent detection, using a fluorescence microscope and a fluorescence scanner. Suitability of employed techniques for further work in this field was evaluated.

Klíčová slova

proteinový čip, microarray, imunostanovení, miniaturizace, multianalytový, multiplexní analýza, high-throughput, fluorescence, imobilizace, konjugace, ink-jet depozice, proteinové interakce, protein microarray, immunoassay, miniaturization, multianalyte, multiplexed analysis high-throughput, immobilization, conjugation, labelling ink-jet depozice, protein interactions

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 19. 5. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 3. 6. 2015
• Vedoucí: doc. RNDr. Petr Skládal, CSc.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Analytická biochemie