HPLC stanovení argininu a N,N-dimetylargininu v krevní plazmě

Mgr. Tomáš Prosecký

Diplomová práce

HPLC determination of arginine and N,N-dimethylarginine in blood plasma

Anotace:

Tato diplomová práce se zabývá možnostmi HPLC stanovení argininu a asymetrického dimetylargininu – ADMA v krevní plazmě. V práci jsou shrnuty publikované postupy stanovení ADMA v krevní plazmě a v moči. Cílem práce bylo prozkoumat možnosti vypracování metody, jenž by s ohledem na dostupnost instrumentace umožňovala stanovení těchto látek z krevní plazmy a částečná validace této metody, bez testu robustnosti. K prekoncentraci argininu a ADMA z krevní plazmy byla použita extrakce na pevné fázi s použitím silných kationtově-výměnných kolonek. Byla prozkoumána možnost separace argininu a ADMA pomocí iontově párovacíchromatografie na chromato- grafické koloně s reverzní fází, s kyselinou trifluoroctovou jako iontově-párovací látkou a stanovení těchto látek v extraktu krevní plazmy pomocí UV/VIS a hmotnostně spektrometrické detekce. Dále byle zkoumána možnost separace a HPLC-fluorescenčního stanovení argininu a ADMA v extraktu krevní plazmy po derivatici fluorescenčním barvivem 7-fluoro-4-nitrobenzo-2-oxo-1,3-diazolem (NBD-F).

Abstract:

This diploma thesis studies the possibility of determination of arginine and asymetrical dimethylarginine – ADMA from human plasma. In this thesis is presented the summary of published methods dealing with determination of arginine and ADMA from human plasma and urine. The objective of this thesis was elaboration of reliable method, which will be capable with consideration to accessibility of instuments to determinate these analytes from human plasma and partial validation of method, without the test of robustness. For preconcentration of analytes of interest from human plasma was used the solid phaseextraction, applying strong cation-exchange columns. Thesis explores the possibilities of separation of arginine and asymetrical dimethylarginine by ion-pair chromatography on reverse phase chromatographic column, using trifluoracetic acid as ion-pair reagent and determination of these analytes from the human plasma extract with UV-VIS and mass spectrometric detection. Further, in this thesis was explored the possibility of separation and HPLC-fluorescence determination of arginine and ADMA in human plasma extract after derivatization withfluorescence reagent 7-fluoro-4-nitrobenzo-2-oxo-1,3-diazol (NBD-F).

Klíčová slova

arginin, arginine, ADMA, N, N-dimetylarginine, N-dimetylarginin, HPLC

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 26. 5. 2006

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 23. 5. 2007
• Vedoucí: doc. Mgr. Jan Havliš, Dr.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Chemie / Analytická chemie